这个计数方法安利给你:荧光染色法评估细胞活率方法概述

发布日期:2020-11-25 16:42:01浏览次数:258

在细胞实验中,细胞计数和存活测试是非常重要的。最常用的方法是使用台盼蓝染色后通过血球计数板进行人工计数,基本原理是台盼蓝可穿透死细胞的细胞膜,使死细胞中的DNA着色,在光学显微镜下可观察到被染成蓝色的死细胞,台盼蓝无法进入活细胞内,可观察到透亮的活细胞。然而,台盼蓝排斥法可以计数细胞系或者纯培养的原代细胞,但是对于一些更复杂的细胞样本,例如PBMCs、髓样细胞、全血细胞,以及含有较多杂质的原代细胞或者低活率、状态比较差的细胞计数效果不佳。近年来,光学仪器和荧光染料的发展使困扰大家已久的复杂细胞计数问题得到解决。对于快速细胞活率计数,大家首选核酸染料。目前,可以通过单染色、双染色或多染色技术检测细胞活力。下面我们介绍一下比较常用的核酸染料和计数方法。



常见的细胞核酸染料及活率计数染色方法

采用细胞核酸染料进行细胞活率计数可以排除红细胞、血小板、组织杂质、细胞碎片等干扰,更准确计数原代杂质较多及活率较低的样本。目前比较常见的核酸染料包括:溴化乙二胺(EB)、碘化丙啶(PI)、7-氨基放线菌素D(7-AAD)、4'、6-二氨基-2-苯吲哚(DAPI)、吖啶橙(AO)、Hoechst33342 (Hoechst)等。下表是对染料基本情况的总结及常见的细胞活率计数染料组合。

表1 常见的细胞核酸荧光染料

表2 细胞活率计数染料组合


Countstar荧光细胞分析仪细胞活率计数方法


Countstar Rigel全自动荧光细胞分析仪基于图像法并配合多荧光通道,通过拍摄细胞图片,采集图像中的细胞信息并进行分析,给大家提供精确的细胞计数结果。可同时采用台盼蓝及荧光染色计数两种方法,可以同时满足客户不同状态细胞的浓度及活率的检测。其中荧光染色主要使用AOPI方法进行计数,计数原理如下图1所示。

1 AOPI荧光染色法计数原理

Countstar Rigel是一个开放的平台,最多可配置4个激发光加5个滤光片组合,检测通道可多达13种。客户可以根据自己的需求进行DIY新的实验。例如,在进行CD分子测量过程中同时加入PI或7-AAD检测细胞活率,最终得到活细胞CD分子表达情况排除死细胞或杂质干扰;或者进行GFP细胞转染结果检测时,细胞溶液中加入PI或7-AAD等,最终得到活细胞转染效率,排除死细胞或杂质干扰等等。