干货!不同类型细胞的检测适用不同的染色方法,总有一款适合你!

发布日期:2021-01-29 11:03:00浏览次数:299

在细胞实验中,细胞浓度、活率的检测是最基础的一步,不同类型的细胞适用不同的染色方法。

最常见的计数方法是台盼蓝染色原理,这种跨膜染料通过观察活死细胞形态来判断细胞活率,中心透亮未着色的为活细胞,被着色呈现实心的为死细胞。近年来随着细胞治疗行业的进步,台盼蓝染色原理已经不能满足复杂的细胞样品的计数,比如原代细胞中的碎片、PBMC中残留的红细胞血小板等杂质碎片、培养后期的细胞,尤其在干细胞、CAR-T、NK等细胞治疗领域台盼蓝计数方法的缺陷尤为突出。

图1 台盼蓝染色原理检测不同阶段的细胞

随之衍生出的AO/PI荧光计数方法(前几期有普及过),采用核酸特异性标记原理,AO(吖啶橙,小分子染料,488激发,525发射)标记细胞核酸发绿色荧光,PI(碘化丙啶,大分子染料,535激发,600发射)标记死细胞核酸发红色荧光,根据活死细胞荧光不同直接排除杂质碎片的干扰,弥补了台盼蓝的不足。AO/PI荧光计数方法在干细胞、CAR-T、NK等细胞治疗领域广受科研工作者的喜爱。

图2 台盼蓝和AO/PI荧光方法检测不同阶段的细胞

针对常规传代培养的细胞和比较复杂的细胞都有了相应的计数方法,帮助我们准确分析细胞的浓度、活率、平均直径等等,还有一类细胞是需要借助纸片微载体培养的,这类细胞的生长成球状,很难实现在线计数,需要借助专门的裂解液,使细胞裂解后得到裸核,通过检测裸核实现细胞浓度的检测,但是这种裂解液对台盼蓝和荧光试剂均有影响,会使台盼蓝团成絮状物,使AO/PI的荧光发生猝灭,这种细胞的裸核计数用最经典的台盼蓝和AO/PI荧光方法均无法实现。

图3 裂解后的裸核台盼蓝染色视野和AO/PI荧光染色视野

面对这种细胞我们Rigel除了台盼蓝活率计数、AO/PI荧光计数法,还有第三种计数方法,细胞计数—明场计数法,这种方法针对只需要检测细胞的生长浓度,不需要检测活率的实验,对于上述提到的纸片微载体培养后裂解的细胞,不需要染色液直接细胞样品上样即可实现细胞浓度计数。

图4 细胞裂解后裸核的检测

不同的细胞类型有不同的检测方法,我们Countstar Rigel荧光细胞分析仪同时提供明场细胞计数、台盼蓝活率计数、AO/PI荧光法计数这三种方法,配备CCD高清摄像头,获取细胞真实的浓度,满足细胞实验检测需求。