免疫蓝斑滴度测定，Castor X1可全孔拍摄并准确识别

发布日期：2023-09-07 11:35:38浏览次数：484

免疫蓝斑滴度测定是一种常用的检测抗体反应的方法，常用于检测病毒特异性抗体。通过该方法，可以测定血清中病毒抗体的含量，有助于判断机体对病毒的免疫状态，评估感染病毒后的免疫应答强度，为预防和治疗病毒感染提供参考。

免疫蓝斑滴度测定的基本操作步骤如下：

1、准备抗原：选择适当的病毒抗原，制成适宜的浓度，并将其均匀涂布在硝酸纤维膜上，形成一层薄膜。

2、加入待测血清：将待测血清样本滴加在膜上，让血清中的抗体与抗原结合形成复合物。

3、加入特异性酶标抗体：选择特异性酶标抗体，该抗体与复合物中的病毒抗原发生反应，形成更复杂的免疫复合物。

4、进行酶反应：加入酶底物，底物在酶的作用下发生颜色变化，根据颜色反应可以判断免疫复合物的多少，从而推算血清中病毒抗体的量。

免疫蓝斑滴度测定的优点包括：

1、快速：该方法操作简单，检测速度快，可以在短时间内得到结果。

2、灵敏：免疫蓝斑滴度测定具有较高的灵敏度，可以检测出较低浓度的病毒特异性抗体。

3、特异：该方法使用的抗原和抗体都具有较高的特异性，可以准确地检测出相应的病毒特异性抗体。

综上所述，免疫蓝斑滴度测定是一种常用的检测抗体反应的方法，具有快速、灵敏和特异等优点。同时，对于不同浓度的病毒特异性抗体，也需要进行不同的处理和检测，以获得更准确的结论。

病毒空斑 / 蓝斑法滴度测定

病毒空斑/噬斑技术是一种基于病毒感染力检测病毒滴度的技术，基本原理为：将贴壁细胞培养至单层后，接种经适当稀释的病 毒并培养，病毒颗粒感染细胞而引起细胞病变，形成一个病变区域，病变区域细胞脱落形成噬斑，一个噬斑可代表一个活的病毒 颗粒，对于多数动物病毒来说，感染病毒颗粒数与噬斑数量呈正比关系。 病毒噬斑技术可广泛应用于病毒滴度的测定，通过噬斑形成单位(plaque-forming unit，PFU)计算病毒滴度。中国药典2020年 版三部对黄热减毒活疫苗、乙型脑炎减毒活疫苗和水痘减毒活疫苗采用噬斑法进行病毒滴度测定均作了详细描述。

单层Vero细胞接种 (eg. 1E6 cells in 6-well, >80% confluence)

制备2%琼脂糖

准备病毒梯度稀释液 (6 doses, 1:10 dilution, top 10-2)

感染细胞单层(1h)

覆盖琼脂糖(6-10 days)

空斑观察计数(空斑形成单位数，PFU/ml)

感染性病毒感染细胞后脱落形成斑块或者病灶，直接检测病毒空斑数量测 定病毒滴度，或者应用标准免疫染色法通过酶标记的特异性抗体检测病毒 滴度，实现对病毒感染细胞的特异标记。Castor X1可全孔拍摄并准确识别病毒空斑或者免疫蓝斑，计算病毒滴度。